ทำความรู้จักกับเซลล์คอมพิเทนท์ (Competent Cells)
4772 Views |
ทำความรู้จักกับเซลล์คอมพิเทนท์ (Competent Cells)
เซลล์คอมพิเทนท์ เป็นเซลล์ที่ถูกทำให้พร้อมรับดีเอ็นเอจากภายนอกเข้าสู่เซลล์ กระบวนการนี้เรียกว่า transformation ทั่วไปนิยมใช้เซลล์แบคทีเรีย มีความสำคัญเป็นอย่างมากในการทำโคลนนิ่ง เพื่อเพิ่มผลผลิตที่ต้องการในปริมาณมากและรวดเร็ว
Artificial (induced) cell competence
Artificial หรือ induced competent cells คือวิธีการนำดีเอ็นเอเข้าสู่เซลล์โดยการกระตุ้นเซลล์คอมพิเทนท์ด้วยไฟฟ้า (electroporation) หรือ สารเคมี (chemical) สามารถสร้างรูพรุนชั่วคราวที่ cell membrane ทำให้ดีเอ็นเอผ่านเข้าสู่เซลล์ได้
Types of artificially competent cells
1. Chemically competent cells
การนำดีเอ็นเอเข้าสู่เซลล์โดยอาศัยสารเคมีกระตุ้นโดยอาศัยขั้นตอน heat-shock คือนำดีเอ็นเอและเซลล์คอมพิเทนท์ที่ผสมกันแล้ว วางไว้ในอุณหภูมิเย็น และเปลี่ยนอุณหภูมิอย่างรวดเร็วไปยังอุณหภูมิร้อน นิยมใช้สารเคมีดังนี้
- CaCl2: Calcium ที่เป็นไอออนบวกจับกับประจุลบของ phospholipid bilayer และดีเอ็นเอ
- DMSO: DMSO จะรวมตัวกับส่วน hydrophilic จาก lipid bilayer ของ cell membrane เมื่อเพิ่มความเข้มข้นของ DMSO ขึ้น จะทำให้เกิด membrane permeability ลดลง เกิดรูพรุนได้ง่าย
- MgCl2: ทำงานเหมือนกับ CaCl2 แต่ช่วยดีเอ็นเอจับกับเซลล์ดีกว่า
- PEG: ช่วยป้องกันประจุลบของ phospholipid bilayer และ DNA
- RbCl: ทำงานเหมือนกับ CaCl2 และ MgCl2 แต่มีประสิทธิภาพสูงกว่า
2. Electrocompetent cells
นำดีเอ็นเอเข้าสู่เซลล์โดยอาศัยไฟฟ้ามีประสิทธิภาพสูงกว่าใช้สารเคมี กระแสไฟฟ้าจะทำให้ cell membrane เกิดการจัดเรียงตัวใหม่และเกิดช่องว่างขึ้น ดีเอ็นจึงสามารถเข้าสู่เซลล์ได้
- Reversible electroporation (RE) : การใช้กระแสไฟฟ้าสูงถึง 1 kV จะทำให้ cell membrane เกิดรูพรุนชั่วคราวและสามารถกลับมาปกติได้
- Irreversible electroporation (IRE) : การใช้กระแสไฟฟ้าสูงถึง 3 kV ทำให้ cell membrane เกิดความเสียหายไม่สามารถซ่อมแซมได้ นำไปสู่การตายแบบ apoptosis
เลือกเซลล์คอมพิเทนท์สำหรับงาน
เซลล์คอมพิเทนท์จากบริษัท Glodbio มีจำหน่ายหลากหลายสำหรับงานของคุณ มีเอกสารขั้นตอนการทำที่เข้าใจง่าย วิดีโอการสอน และคู่มือการเลือกเพื่อให้แน่ใจว่าการ transformation ของคุณประสบความสำเร็จ! สามารถเลือกเซลล์คอมพิเทนท์ให้เหมาะกับงานของคุณตามด้านล่างเลย
|
|
|
|
|
|
|
|
|
 |  |
